Анализаторы сайтов. Бесплатные программы анализа сайта

Автор: Parser | Октябрь 27, 2020

Анализаторы сайтов это программы или онлайн-сервисы, позволяющие провести анализ сайта по большому количеству показателей, влияющих на его положение в поисковых системах интернета. Существуют как бесплатные, так и платные инструменты для проведения анализа сайта.
Вначале пути своего продвижения сайта или блога, предпочтительнее использовать в основном бесплатные инструменты, тем более многие из них мало в чем уступают своим платным аналогам по определению основных показателей сайта.

Domain Watcher

Бесплатный анализатор сайтов для ежедневной проверки таких основных показателей как:

• IP адрес сайта
• Показателей ТИЦ Яндекса и PR Google
• Количество проиндексированных страниц в поисковых системах Яндекс, Google, Рамблер
• Количество проиндексированных изображений в Google
• Количество обратных ссылок по Яндекс и Yahoo
• Статистику LiveInternet
• Информация «whois» домена (сроки начала и окончания регистрации домена)
• История изменений параметров

Программа очень быстрая, работает также с прокси. Встроенный фильтр по параметрам позволяет настроить программу на нужную вам информацию о сайте, что очень удобно в работе.

Определяйка

Анализатор страниц сайта «Определяйка», еще один бесплатный инструмент для анализа сайтов. Предназначена для массового анализа сайтов по большому количеству параметров позволяющие оценивать качество сайтов. Отличается от других подобных большим выбором параметров (более 37) для анализа и высокой скоростью работы. Проверит сайт по таким основным параметрам как:

• IP адрес сервера сайта
• Страна и город сервера
• Тематику и регион вашего блога
• ТИЦ, PR и Alexa Rank сайта
• Количество проиндексированных страниц в Яндекс, Google
• Количество внешних ссылок по Yahoo и Bing
• Количество ссылок с блогов Яндекс
• Количество внутренних и внешних ссылок на главной странице
• Наличие в каталогах Yandex и Dmoz
• Количество упоминаний в Google и Yandex
• Информацию о сайте по данным сервиса SEOmoz. org (авторитет, популярность, траст, количество ссылок)
• Склейку домена в Яндекс и Гугл
• Информация о возрасте
• Язык сайта

Программа умеет работать с прокси и сервисом Antigate, доступно сохранение и экспорт результатов анализа. Инструмент «Определяйка» один из лучших бесплатных анализаторов сайта, который поможет качественно оценить как свой сайт, так и сайты ваших конкурентов.

MChecker

Иногда возникает необходимость в быстром определении ТИЦ и PR, URL адресов ссылок. В этом поможет небольшого размера, бесплатная декстопная программа для массовой проверки таких показателей как:

• ТИЦ Яндекса и PR Google отдельных страниц
• Наличие в каталогах DMOZ и Yandex

Программа позволяет изменять количество потоков проверки на «лету» с возможностью регулировки времени задержки. Результаты анализа можно сохранять в файлы «txt», «excel» и сортировать по параметрам.

Эти seo анализаторы сайта не требуют инсталляции на компьютер. В основном окне каждой программы находится ссылка на свой сайт, поэтому все подробности можно узнать перейдя по ссылкам.

Скачать

Чей ТИЦ безопаснее?

По мнению Ассоциации «Безопасность туризма» туристские информационные центры (ТИЦ) — должны стать ключевым элементом в информировании, обеспечении безопасности и помощи туристам.

Ассоциация «Безопасность туризма» не оставляет вопрос туристско-информационных центров, а именно, что именно считать ТИЦем, какова их роль в продвижении туристского продукта и как эти самые ТИЦы стоят на страже безопасности туристов.

Сегодня предлагаем сверить часы с иностранными коллегами и посмотреть, что же входит в полномочия туристско-информационных центров за рубежом.

Зачастую, в иностранных (американских и европейских) туристско-информационных центрах присутствует представитель правоохранительных органов. Одет он может быть как  в служебную форму, так и в гражданскую одежду. Притом, считается, что увидев  сотрудника именно в служебной форме, турист чувствует себя защищённее.

В других странах ТИЦ – это отличный инструмент борьбы с потенциальными преступлениями. Сотрудники центра объясняют туристам, как проследовать к городским достопримечательностям самым безопасным путем (например, показывают самую освещенную дорогу в темное время суток). Также нормальной практикой считается раздавать путешествующим карты, в которых указано, в какое время лучше не посещать тот или иной район города, а какие территории лучше и вовсе обходить стороной.

Очевидный, но, тем не менее, очень важный пункт — размещение на территории ТИЦа актуального и хорошо читаемого расписания общественного транспорта.

У самых ответственных руководителей ТИЦев за рубежом разработан план действий на случай чрезвычайного происшествия с туристом (нападение, ограбление и т.д.), а также есть план защиты туристических достопримечательностей от потенциальных преступников/террористов (заборы, живые изгороди, которые одновременно защищают территорию объекта и не дают потеницальному преступнику/террористу укрыться.

В Росии же ситуация с ТИУами довольно странная. Так, по данным Ростуризма на 1 июня 2018 года в России насчитывается 192 ТИЦ, а по данным Минкульутры в России – 360 ТИЦ. При этом, анализ показывает, что далеко не все существующие ТИЦ, в том числе в Москве,  таковыми являются. Примерно четверть ТИЦ даже сайтов не имеют, не говоря о качестве и наполненности контентом существующих. И как отражение этой картинки — результаты опроса туротрасли.

Эксперты Ассоциации считают, что некоторые руководители так и не поняли и не исполнили требования закона и ГОСТа, согласно которым одна из задач ТИЦ- это информирование об опасностях и мерах безопасности, оказание помощи туристам.  Считаем, ТИЦам на территориях туристско-рекреационных кластеров и комплексов должна быть отведена ключевая роль в информационном обеспечении и всяческом содействии туристам, оказании им экстренной помощи посредством мониторинга, информационного обмена, координации и взаимодействия с соответствующими службами, органами и организациями.

Редакция журнала «Безопасность индустрии туризма» в настоящее время продолжает получать ответы от органов госвласти субъектов РФ о возможности и целесообразности расширения функционала ТИЦ в сфере безопасности, с которыми вы сможете ознакомиться в нашем новом номере.

Если вы тоже являетесь сотрудником или руководителем информационного центра, присылайте ваше мнение нам на почту [email protected].

Масс-анализаторы (масс-спектрометрия) — Химия LibreTexts

1. Последнее обновление

2. Сохранить как PDF

Масс-спектрометрия — это аналитический метод, который использует ионизацию и массовый анализ соединений для определения массы, формулы и структуры анализируемого соединения. Масс-анализатор — это компонент масс-спектрометра, который берет ионизированные массы и разделяет их на основе отношения заряда к массе и выводит их на детектор, где они обнаруживаются, а затем преобразуются в цифровой выход.

Введение

Существует шесть основных типов масс-анализаторов, которые можно использовать для разделения ионов в масс-спектрометрии.

1. Квадрупольный масс-анализатор
2. Времяпролетный анализатор массы
3. Анализатор массы с магнитным сектором
4. Анализатор массы электростатического сектора
5. Масс-анализаторы с квадрупольной ионной ловушкой
6. Ионный циклотронный резонанс

Квадрупольный масс-анализатор

Смещение постоянного тока заставит все заряженные молекулы ускоряться и удаляться от центральной линии, причем скорость будет пропорциональна отношению их заряда к массе. Если их курс зайдет слишком далеко, они ударятся о металлические стержни или стенки контейнера и будут поглощены. Таким образом, смещение постоянного тока действует как магнитное поле B масс-спектра и может быть настроено на конкретное отношение заряда к массе, попадающее на детектор.

Рисунок \(\PageIndex{1}\): Квадруполь

Два синусоидальных электрических поля с ориентацией 90° и фазовым сдвигом 90° создают электрическое поле, которое со временем колеблется по кругу. Так что, когда заряженные частицы летят вниз к детектору, они будут двигаться по спирали, диаметр спирали определяется отношением заряда к массе молекулы, а также частотой и напряженностью электрического поля. Комбинация смещения постоянного тока и вращающегося по кругу электрического поля заставит частицы заряда двигаться по изогнутой спирали. Таким образом, синхронизируя пик изогнутой спирали с положением детектора на конце квадруполя, можно получить большую селективность в отношении отношения заряда молекул к массе.

TOF (времяпролетный) масс-анализатор

TOF-анализаторы разделяют ионы по времени без использования электрического или магнитного поля. В грубом смысле TOF похож на хроматографию, за исключением того, что здесь нет стационарной/подвижной фазы, вместо этого разделение основано на кинетической энергии и скорости ионов.

Рисунок \(\PageIndex{2}\): Система TOF. Со временем ионы (образующиеся в источнике) разделяются.

Ионы с одинаковыми зарядами имеют одинаковые кинетические энергии; кинетическая энергия иона в пролетной трубе равна кинетической энергии иона на выходе из ионного источника: 92}{2} = zV \label{1}\]

Время полета, или время, за которое ион проходит длину пролетной трубки:

\[T_f = \dfrac{L}{ v} \label{2}\]

• , где \(L\) — длина трубы, а
• \(v\) — скорость иона

Подставив уравнение 1 для кинетической энергии в уравнение 2 для времени пролета:

\[T_f = L\sqrt{\dfrac{m}{z}}\sqrt{ \dfrac{1}{2 V}} \propto \sqrt{\dfrac{m}{z}} \label{3}\]

Во время анализа \(L\), длина трубки, напряжение от ионного источника \(V\) поддерживаются постоянными, что можно использовать, чтобы сказать, что время полета прямо пропорционально корню из отношения массы к заряду.

К сожалению, при более высоких массах разрешение затруднено, поскольку время полета больше. Также при больших массах не все ионы с одинаковыми значениями m/z достигают своих идеальных скоростей TOF. Чтобы устранить эту проблему, часто к анализатору добавляют рефлектрон . Рефлектрон состоит из ряда кольцевых электродов очень высокого напряжения, расположенных на конце пролетной трубы. Когда ион попадает в рефлектрон, он отражается в противоположном направлении из-за высокого напряжения. Рефлектрон увеличивает разрешение за счет сужения широкополосного диапазона времени пролета для одного значения m/z. Более быстрые ионы проникают дальше в рефлекторы, а более медленные ионы меньше проникают в рефлектор. Таким образом, и медленные, и быстрые ионы с одинаковым значением m/z достигают детектора одновременно, а не в разное время, сужая полосу пропускания выходного сигнала.

Рисунок \(\PageIndex{3}\): (слева) отражение. из Википедии. (справа) 4. Фотография рефлектрона. Ионное зеркало (справа), прикрепленное к пролетной трубе (слева) рефлектрона. Напряжения, прикладываемые к стопке металлических пластин, создают электрическое поле, отражающее ионы обратно в полетную трубу. В этой конкретной конструкции зазоры между зеркальными электродами слишком велики. Это может привести к искажению поля внутри зеркала, вызванному близостью металлической поверхности огибающей вакуумной трубки. из Википедии.

Анализатор массы магнитного сектора

Подобно анализатору времени пролета (TOF), упомянутому ранее, в анализаторах магнитного сектора ионы ускоряются через полетную трубку, где ионы разделяются по отношению заряда к массе. Отличие магнитного сектора от TOF заключается в том, что для разделения ионов используется магнитное поле. Когда движущиеся заряды входят в магнитное поле, заряд отклоняется в круговое движение уникального радиуса в направлении, перпендикулярном приложенному магнитному полю. На ионы в магнитном поле действуют две равные силы; сила, обусловленная магнитным полем и центростремительной силой. 92}{2V} \label{7}\]

Рисунок \(\PageIndex{4}\): Магнитный разделитель секторов.

В основном ионы с определенным значением \(m/z\) будут иметь уникальный радиус пути, который можно определить, если учесть как величину магнитного поля \(B\), так и разность напряжений \(V\) для области ускорения постоянный. когда аналогичные ионы проходят через магнитное поле, все они будут отклоняться в одинаковой степени и все будут следовать одной и той же траектории. Те ионы, которые не отобраны по значениям \(V\) и \(B\), будут сталкиваться с любой стороной стенки пролетной трубы или не пройдут через щель к детектору. Анализаторы магнитных секторов используются для фокусировки масс, они фокусируют угловые дисперсии.

Электростатический секторный масс-анализатор

Похож на времяпролетный анализатор тем, что разделяет ионы во время полета, но разделяет их с помощью электрического поля. Электростатический секторный анализатор состоит из двух изогнутых пластин с одинаковым и противоположным потенциалом. Когда ион проходит через электрическое поле, он отклоняется, и сила, действующая на ион из-за электрического поля, равна центростремительной силе, действующей на ион. Здесь ионы с одинаковой кинетической энергией фокусируются, а ионы с разной кинетической энергией рассеиваются. 92}{R} \label{9}\]

Электростатические секторные анализаторы представляют собой фокусеры энергии, в которых ионный пучок фокусируется для получения энергии. Анализаторы электростатического и магнитного секторов, используемые по отдельности, представляют собой приборы с одной фокусировкой. Однако когда оба метода используются вместе, это называется инструментом двойной фокусировки, потому что в этом инструменте фокусируются как энергии, так и угловые дисперсии.

Масс-анализаторы с квадрупольной ионной ловушкой

В этом анализаторе используются те же принципы, что и в упомянутом выше квадрупольном анализаторе, он использует электрическое поле для разделения ионов по отношению массы к заряду. Анализатор выполнен с кольцевым электродом определенного напряжения и заземленными торцевыми электродами. Ионы попадают в область между электродами через одну из торцевых заглушек. После входа электрическое поле в полости, создаваемое электродами, заставляет ионы с определенными значениями m/z двигаться по орбите в пространстве. По мере увеличения радиочастотного напряжения орбиты ионов с более тяжелой массой становятся более стабильными, а ионы с легкой массой становятся менее стабилизированными, что приводит к их столкновению со стенкой и исключает возможность перемещения к детектору и его обнаружения.

Рисунок \(\PageIndex{5}\): Схема квадрупольной ионной ловушки классической установки с частицей положительного заряда (темно-красный), окруженной облаком одноименно заряженных частиц (светло-красный). Электрическое поле E (синее) создается квадруполем торцевых заглушек (а, положительный) и кольцевым электродом (б). На рисунках 1 и 2 показаны два состояния во время цикла переменного тока. (CC BY 2.5; Ариан Криш Акриш из Википедии).

В квадрупольной ионной ловушке обычно применяется масс-селективный выброс, при котором она избирательно выбрасывает захваченные ионы в порядке возрастания массы за счет постепенного увеличения приложенного радиочастотного напряжения.

Ионно-циклотронный резонанс (ICR)

ICR — это ионная ловушка, которая использует магнитное поле для захвата ионов на орбиту внутри себя. В этом анализаторе не происходит разделения, а все ионы определенного диапазона задерживаются внутри, а приложенное внешнее электрическое поле помогает генерировать сигнал. Как упоминалось ранее, когда движущийся заряд входит в магнитное поле, на него действует центростремительная сила, заставляющая ион двигаться по орбите. Снова сила, действующая на ион из-за магнитного поля, равна центростремительной силе, действующей на ион. 92}{r} \label{10}\]

Здесь можно подставить угловую скорость иона перпендикулярно магнитному полю \(w_c=v/r\)

\[zB=mw_c \label{11}\ ]

\[w_c=\dfrac{zB}{m} \label{12}\]

Частота орбиты зависит от заряда и массы ионов, а не от скорости. Если магнитное поле поддерживается постоянным, отношение заряда к массе каждого иона может быть определено путем измерения угловой скорости \(\omega_c\). Связь заключается в том, что при высоком \(w_c\) значение m/z низкое, а при низком \(\omega_c\) значение m/z высокое. Заряды разных знаков имеют одинаковую угловую скорость, с той лишь разницей, что они вращаются в противоположном направлении.

Рисунок \(\PageIndex{6}\): Ловушка ICR.

Для генерации электрического сигнала от захваченных ионов к ионной ловушке прикладывают переменное электрическое поле

\[E=E_o \cos{(\omega_c t)} \label{13}\]

\omega_c\) в электрическом поле соответствует \(\omega_c\) определенного иона, ион поглощает энергию, увеличивая скорость и радиус обращения иона. На этой высокоэнергетической орбите, когда ион колеблется между двумя пластинами, электроны накапливаются на одной из пластин над другой, вызывая колебательный ток или текущее изображение. Ток прямо пропорционален количеству ионов в ячейке на определенной частоте.

В ICR с преобразованием Фурье все ионы внутри клетки возбуждаются одновременно, так что текущее изображение совмещается с изображением частот всех отдельных ионов. Преобразование Фурье используется для дифференциации суммированных сигналов для получения желаемых результатов.

Ссылки

1. К. Даунард, Масс-спектрометрия: базовый курс, Королевское химическое общество: Великобритания, 2004 г., глава 3
2. Скуг, Холлер, Грауч, Принципы инструментального анализа , Томсон Брукс/Коул 2007, глава 20
3. C. Herbert, R. Johnstone, Основы масс-спектрометрии, CRC Press LLC, 2003, главы 25, 26, 39
4. Э. Де Хоффман, В. Строобант, Масс-спектрометрия: принципы и приложения , 2 ^{, изд.} ; Wiley: England, 2001, глава 2

Авторы и авторство

• Оммайма Хан

1. Наверх

• Была ли эта статья полезной?

1. Тип изделия

   Раздел или Страница

   Показать страницу TOC

   № на стр.

2. Теги

   1. масс-анализаторы

Обзор масс-спектрометрии | Thermo Fisher Scientific

Масс-спектрометрический (МС) анализ белков измеряет отношение массы к заряду ионов для идентификации и количественного определения молекул в простых и сложных смесях. MS стала бесценной в широком диапазоне областей и приложений, включая протеомику. Развитие высокопроизводительных и количественных рабочих процессов протеомики MS в течение последних двух десятилетий расширило объем того, что мы знаем о структуре, функции, модификации и глобальной динамике белка. В этом обзоре описывается роль масс-спектрометрии в области протеомики, рассматривается методология и инструменты МС, а также затрагивается подготовка образцов и разделение на основе жидкостной хроматографии перед анализом МС.

Страница Содержание

• Введение в масс -спектрометрию белка
• Применение масс -спектрометрии белка
• Количественная протеомика
• Прозрачный протеиновый протеин. Рабочие процессы
• Калибровочные растворы, стандарты и растворители для масс-спектрометрии

Введение в масс-спектрометрию белков

Протеомика — это изучение всех белков в биологической системе (например, клетках, ткани, организме) во время определенных биологических событий. Геномику и протеомику вместе изучать значительно труднее, чем геномику или даже транскриптомику по отдельности, из-за динамической природы экспрессии белка. Кроме того, большинство белков подвергаются той или иной форме посттрансляционной модификации (PTM), что еще больше увеличивает протеомную сложность. В течение последних 15 лет широкие возможности протеомики только начинают реализовываться во многом благодаря технологическим разработкам в области масс-спектрометрии.

Масс-спектрометрия является чувствительным методом, используемым для обнаружения, идентификации и количественного определения молекул на основе отношения их массы к заряду ( m/z ). Первоначально разработанный почти 100 лет назад для измерения атомных весов элементов и естественного содержания определенных изотопов, МС впервые был использован в биологических науках для отслеживания тяжелых изотопов в биологических системах. В последующие годы МС использовали для секвенирования олигонуклеотидов и пептидов и анализа структуры нуклеотидов.

Развитие методов ионизации макромолекул, включая ионизацию электрораспылением (ESI) и химическую ионизацию при атмосферном давлении (APCI), позволило изучить структуру белка с помощью MS. Ионизация также позволила ученым получить «отпечатки пальцев» белковой массы, которые можно сопоставить с белками и пептидами в базах данных и помочь идентифицировать неизвестные цели. Новые методы мечения изотопами привели к количественному определению белков-мишеней как в относительных, так и в абсолютных количествах. Результатом всех этих технологических достижений стали методы, позволяющие успешно анализировать образцы в твердом, жидком или газообразном состояниях. Чувствительность современных масс-спектрометров позволяет обнаруживать аналиты при концентрациях в аттомолярном диапазоне (10 ^-18 ).

Центр цифровых ресурсов масс-спектрометрии

Улучшите результаты масс-спектрометрии
Посетите новый центр цифровых ресурсов для масс-спектрометрии, чтобы получить практическую информацию и советы, которые помогут вам в достижении ваших целей. Зайдите на сайт, чтобы получить доступ к этим бесплатным ресурсам:

• Загружаемый справочник Thermo Scientific по подготовке и количественному анализу белков для масс-спектрометрии с инструментами и методами для более надежной и воспроизводимой обработки образцов, количественного анализа белков и калибровки приборов
• Полезные официальные документы и новейшие плакаты по конкретным приложениям, таким как субклеточное фракционирование, фракционирование пептидов, изобарное мечение и т. д.
  Приложения масс-спектрометрии белков
  

  Масс-спектрометрия измеряет соотношение ионов m/z для идентификации и количественного определения молекул в простых и сложных смесях. MS стала бесценной в широком диапазоне областей и приложений, включая протеомику. Развитие высокопроизводительных и количественных рабочих процессов протеомики МС за последние два десятилетия расширило объем того, что мы знаем о структуре, функциях и модификациях белков, а также о глобальной динамике белков.

  В этом обзоре описывается роль масс-спектрометрии в области протеомики, а также рассматриваются методология и инструменты МС. Он также касается подготовки проб и разделения на основе жидкостной хроматографии перед МС-анализом.

  Common applications and fields that use mass spectrometry

  Field of study	Applications
  Proteomics	Определение структуры, функции, фолдинга и взаимодействия белков. Определите белок по массе его пептидных фрагментов. Обнаружение специфических посттрансляционных модификаций в сложных биологических смесях с использованием рабочих процессов для фосфопротеомики и гликозилирования белков. Количественное определение белков (относительное или абсолютное) в данном образце. Мониторинг ферментативных реакций, химических модификаций и переваривания белков.
  Открытие лекарств	Определение структур лекарств и метаболитов. Скрининг метаболитов в биологических системах.
  Клинические тесты	Проведение судебно-медицинских экспертиз, таких как подтверждение злоупотребления наркотиками. Обнаружение биомаркеров заболеваний (например, новорожденных, обследованных на метаболические заболевания).
  Геномика	Последовательность коротких олигонуклеотидов.
  Окружающая среда. Анализ загрязняющих веществ в образцах почвы.
  Геология	Измерение состава нефти. Выполнение радиоуглеродного анализа.

  Все масс-спектрометры имеют источник ионов, масс-анализатор и детектор ионов. Природа этих компонентов зависит от назначения масс-спектрометра, типа требуемых данных и физических свойств образца. Образцы загружаются в масс-спектрометр в жидком, газообразном или высушенном виде, а затем испаряются и ионизируются источником ионов (например, APCI, DART, ESI).

  Схема основных компонентов масс-спектрометра.

  ---

  Заряд, который получают эти молекулы, позволяет масс-спектрометру ускорять ионы в остальной части системы. Ионы сталкиваются с электрическими и/или магнитными полями масс-анализаторов, которые отклоняют траектории отдельных ионов на основе их m/z . Обычно используемые масс-анализаторы включают времяпролетные [TOF], орбитальные ловушки, квадруполи и ионные ловушки, и каждый тип имеет определенные характеристики. Масс-анализаторы можно использовать для разделения всех аналитов в образце для общего анализа или их можно использовать в качестве фильтра для отклонения только определенных ионов к детектору.

  Ионы, которые успешно отклоняются масс-анализаторами, попадают в детектор ионов. Чаще всего эти детекторы представляют собой электронные умножители или микроканальные пластины, испускающие каскад электронов, когда каждый ион попадает на детекторную пластину. Этот каскад приводит к усилению каждого удара иона для повышения чувствительности. Весь этот процесс выполняется в условиях экстремального вакуума (от 10 ^-6 до 10 ^-8 торр) для удаления молекул газа и нейтральных и загрязняющих ионов, отличных от пробы, которые могут сталкиваться с ионами пробы и изменять их траектории или вызывать нежелательные явления. специфические продукты реакции.

  Более новая технология Thermo Scientific Orbitrap улавливает ионы вокруг центрального электрода шпинделя, а затем анализирует их значения m/z по мере их движения по шпинделю с различными частотами гармонических колебаний.

  Масс-спектрометры подключены к компьютерным программным платформам, которые измеряют частоты колебаний ионов и получают масс-спектры с использованием детектирования тока изображения. Программы анализа данных обнаруживают ионы и организуют их по отдельности  90 240 m/z значений и относительной численности. Затем эти ионы можно идентифицировать с помощью установленных баз данных, которые предсказывают идентичность молекулы на основе ее значения 90 240 m/z 90 241.

  Посмотрите это видео, чтобы узнать больше о масс-спектрометре Orbitrap Fusion.
  

  ---

  Схема секторного† масс-спектрометра. Образец вводится в масс-спектрометр, молекулы ионизируются и ускоряются. Затем ионы разделяются масс-анализатором по массе и заряду посредством электромагнитного отклонения, и ионы, которые правильно выровнены, обнаруживаются и усиливаются. Вся система находится под интенсивным вакуумом в течение всего процесса. После усиления сигнала генерируемые данные сообщают об относительном содержании каждого иона на основе его отношения массы к заряду (m/z). † Хотя использование секторных приборов сократилось из-за усовершенствования масс-анализаторов (например, квадрупольных, орбитальных), эта упрощенная диаграмма передает ключевой принцип масс-спектрометрии, заключающийся в ее способности выбирать и анализировать определенные ионы в сложном образце.

  ---

  Тандемная масс-спектрометрия (МС/МС)

  Тандемная масс-спектрометрия (МС/МС) дает дополнительную информацию о конкретных ионах. В этом подходе отдельные представляющие интерес ионы находятся в квадрупольном фильтре на основе их m/z во время первого раунда МС и фрагментируются рядом различных методов диссоциации. Один из таких методов включает столкновение ионов с потоком инертного газа, что известно как диссоциация, индуцированная столкновением (CID), или диссоциация столкновений с более высокой энергией (HCD). Другие методы фрагментации ионов включают диссоциацию с переносом электронов (ETD) и диссоциацию с захватом электронов (ECD).

  Затем эти фрагменты разделяют на основе их индивидуальных соотношений m/z во втором цикле МС. МС/МС обычно используется для секвенирования белков и олигонуклеотидов, поскольку фрагменты можно использовать для сопоставления предсказанных последовательностей пептидов или нуклеиновых кислот соответственно, которые находятся в таких базах данных, как IPI, RefSeq и UniProtKB/Swiss-Prot. Затем эти фрагменты последовательности могут быть организованы in silico в полноразмерные предсказания последовательности.

  Схема тандемной масс-спектрометрии (МС/МС). Образец вводится в масс-спектрометр, ионизируется, ускоряется и анализируется методом масс-спектрометрии (МС1). Затем ионы из спектров MS1 селективно фрагментируются и анализируются на втором этапе масс-спектрометрии (MS2) для создания спектров для фрагментов ионов. Хотя на диаграмме показаны отдельные масс-анализаторы (МС1 и МС2), в некоторых приборах используется один масс-анализатор для обоих циклов МС.

  ---

  Биологические образцы часто довольно сложны и содержат молекулы, которые могут маскировать обнаружение целевой молекулы, например, когда образец демонстрирует большой динамический диапазон концентраций между целевым(и) аналитом(ами) и другими молекулами в образце. Для отделения целевого аналита от других молекул в образце обычно используются два метода разделения.

  Газовая хроматография (ГХ) и жидкостная хроматография (ЖХ)

  Газовая хроматография (ГХ) и жидкостная хроматография (ЖХ) являются распространенными методами разделения перед МС, которые используются при анализе сложных газовых или жидких проб с помощью МС, соответственно. Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) обычно применяется для анализа термически нестабильных и нелетучих молекул (например, чувствительных биологических жидкостей), тогда как газовая хроматография-масс-спектрометрия (ГХ-МС) используется для анализа летучих соединений, таких как как нефтехимия. ЖХ-МС и ГХ-МС также используют разные методы ионизации соединения при его введении в масс-спектрометр. В ЖХ-МС обычно применяется ионизация электрораспылением (ESI), что приводит к образованию аэрозольных ионов. С помощью ГХ-МС образец может быть ионизирован прямо или косвенно   через ESI.

  Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

  Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) — наиболее распространенный метод разделения для изучения биологических образцов с помощью МС или МС/МС (называемый ЖХ-МС или ЖХ-МС/МС соответственно), так как большинство биологических образцов являются жидкими и нелетучими. Колонки для ЖХ имеют малый диаметр (например, 75 мкм; наноВЭЖХ) и низкую скорость потока (например, 200 нл/мин), что идеально подходит для мелких образцов. Кроме того, жидкостная хроматография «в потоке» (ЖХ связана непосредственно с МС) обеспечивает высокопроизводительный подход к анализу проб, позволяя элюировать несколько аналитов через колонку с разной скоростью для немедленного анализа с помощью МС. Например, от 1 до 5 пептидов в сложной биологической смеси можно секвенировать в секунду с помощью встроенной ЖХ-МС/МС.

  Пример встроенной системы ЖХ-МС/МС. Thermo Scientific Q Exactive Plus с УВЭЖХ Dionex UltiMate 3000.

  ---

  Введение в УВЭЖХ
  

  Select Products

  • ORBITRAP LC-MS
  • Количественный рабочий процесс TMT
  • Калибровочные растворы, стандарты и растворители для масс-спектрометрии
  • Mass-Spectrometry
  • для масс-спектрометрии LC-MS3
  • для масс-спектрометрии LC-MS3
  • для масс-спектрометрии LC-MS3
  • для масс-спектрометрии LC-MS3

  10110

  • для масс-спектрометрии LC-MS3
  • для жидкостной хроматографии (LC-MS3. Масс-спектрометрия

  ---

  Количественная протеомика
  

  В то время как масс-спектрометрия может обнаруживать очень низкие концентрации аналита в сложных смесях, МС по своей сути не является количественным из-за значительной потери пептидов и ионов во время анализа. Таким образом, пептидные метки или стандарты анализируются одновременно с образцом и служат точкой отсчета как для относительного, так и для абсолютного количественного определения аналита соответственно. Теперь доступны коммерческие продукты, которые позволяют обнаруживать и количественно определять несколько белков в одной реакции, демонстрируя глобальную аналитическую платформу с высокой пропускной способностью, которой МС стала в области протеомики.

  Относительное количественное определение

  Стратегии относительного количественного определения включают мечение стабильными изотопами с использованием аминокислот в культуре клеток (SILAC) и тандемное массовое мечение (TMT). В этих подходах белки или пептиды метят стабильными изотопами, что придает им отчетливый сдвиг массы по сравнению с немечеными аналитами. Эта разница в массе может быть обнаружена с помощью МС и обеспечивает отношение уровней немеченого аналита к уровню меченого. Эти подходы часто используются в протеомике открытий, где многие белки идентифицируются в широком динамическом диапазоне с использованием меток разного размера.

  Абсолютное количественное определение

  Абсолютное количественное определение выполняется в целевых протеомных экспериментах и ​​повышает чувствительность обнаружения для ограниченного числа целевых аналитов. Эти подходы требуют добавления в образец известных количеств синтетических пептидов, содержащих тяжелые стабильные изотопы, которые действуют как внутренние количественные стандарты для абсолютного количественного определения соответствующих природных пептидов в образце.

  Рабочий процесс SILAC. Мечение стабильными изотопами аминокислот в культуре клеток (SILAC) требует выращивания клеток млекопитающих в специализированных средах с дефицитом лизина и аргинина. Этот дефицит компенсируется добавлением легких или тяжелых форм недостающих аминокислот (например, ¹² C ₆ и ¹³ C ₆ L-лизин). Типичный эксперимент включает выращивание одной клеточной популяции на среде, содержащей легкие аминокислоты (контроль), а другой популяции — в присутствии тяжелых аминокислот (опыт). Тяжелые и легкие аминокислоты включаются в белки посредством естественного клеточного синтеза белка. После изменения протеома в одном образце с помощью химической обработки или генетических манипуляций равные количества белка из обеих клеточных популяций затем объединяют, разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с SDS (SDS-PAGE) и расщепляют трипсином перед МС-анализом.

  Learn Dire

  • Количественная протеомика
  • Обзор технологии молекулярной диссоциации
  • Количественный белок с использованием масс -спектрометрии

  Select Products

  • SILAC Metabeling Labeling Systems
  • Силэк

  10101010101010101010 гг.

  • Количественная протеомика Масс-спектрометрия Рабочие процессы

  ---

  Подготовка образца белка
  

  Все образцы требуют определенной подготовки перед исследованием с помощью МС для удаления детергентов и уменьшения сложности образца при сосредоточении внимания на конкретных белках и/или белках-метках для идентификации/количественного определения. Правильная подготовка проб имеет решающее значение для анализа МС, поскольку качество и воспроизводимость извлечения и подготовки проб значительно влияют на результаты, полученные с помощью инструментов МС. Подготовка проб включает в себя широкий спектр методов, включая подготовку лизатов, обогащение белком или пептидами, а также очистку проб и расщепление белков.

  Посмотрите это видео, чтобы узнать больше о подготовке образцов белка для масс-спектрометрии.
  

  Узнать больше

  • Подготовка проб для масс-спектрометрии
  • Типы проб для ЖХ-МС
  • Обзор аффинной очистки

  Выбрать продукты

  6 5 6 11003 Подготовка проб для масс-спектрометрии 900 900
  Рекомендуемое чтение
  
  1. Кустер Б. и др. (2005)Оценка протеомов с помощью протеотипических пептидных зондов. Nat Rev Mol Cell Biol 6:577–583.
  2. Маллик П., Кастер Б. (2010) Протеомика: прагматическая перспектива. Nat Biotechnol 28:695–709.
  3. Willard HH (1988) Инструментальные методы анализа. Белмонт (Калифорния): паб Wadsworth. Co. xxi, стр. 895.
  4. Finehout EJ, Lee KH (2004) Введение в применение масс-спектрометрии в биологических исследованиях. Biochem Mol Biol Educ 32:93–100.
  5. Chowdhury SK et al. (1990) Масс-спектрометрическое картирование пептидов с ионизацией электрораспылением: быстрый и чувствительный метод анализа структуры белка. Biochem Biophys Res Commun 167:686–92.
  6. Fenn JB et al. (1989) Ионизация электрораспылением для масс-спектрометрии больших биомолекул. Наука 246:64–71.
  7. Барбер М. и др. (1981) Бомбардировка твердых тел быстрыми атомами как источник ионов в масс-спектроскопии. Природа 293:270–5.
     

     This entry was posted in Тиц